Исследование спермы при мужском бесплодии

Автор статьи: 
Лилия Матвеева, лаборант
Проголосовать: 
Средняя оценка: 5 (1 голос(ов))
Анализ эякулята у мужчин

Исследование спермы: популярные и эффективные методы

Исследования спермы позволят выявить причину бесплодия у мужчин. В этой статье мы расскажем об основных методах исследования эякулята.

Биохимическое исследование эякулята

Наибольшее практическое значение имеет установление количества фруктозы и величины фруктолизу в эякуляте. Количество фруктозы дает возможность судить о функции клеток, а фруктолизу - о жизнеспособности сперматозоидов. Методика определения фруктозы в эякуляте: 0,5 мл эякулята, взятого через час после эякуляции, смешивают в пробирке с 0,9 мл дистиллированной воды, добавляют 2 мл 2% раствора кристаллического сульфата цинка и 2 мл 0,5% раствора едкого натра, нагревают в теплой водяной бане в течение 5 минут и фильтруют.

До 2 мл прозрачного фильтрата добавляют 2 мл 0,1% спиртового раствора резорцина и 6 мл 30% раствора соляной кислоты. Смесь нагревают в водяной бане при 80-85 ° в течение 10 минут. Затем быстро охлаждают под текучей холодной водой. Взята количество фильтрата (2 мл) соответствует 0,04 мл эякулята.

Интенсивность полученного при этом бордовой окраски измеряют на фотоэлектрокалориметры ФЭК-М. Прибор позволяет определить содержание фруктозы по кривой, начерченной на основании измерений растворов фруктозы различной концентрации. Ix обрабатывают, как и эякулят, по описанной выше методике. Чтобы получить эту кривую, химически чистую фруктозу высушивают в течение трех недель в эксикаторе над хлоридом кальция.

Через час после первого исследования повторно определяют количество фруктозы в эякуляте. Разница между данными повторного и первичного определения указывает на величину фруктолизу. Фруктолиз нормальный, когда разница большая от 20 и снижен, когда она меньше 20.

Для полного биохимического исследования эякулята следует определить в нем содержание аскорбиновой и лимонной кислот и кислой фосфатазы.

Оценка оплодотворяющей способности спермы

Основными показателями свойств эякулята принято считать количество сперматозоидов в 1 мл, процент активно подвижных и морфологически нормальных форм.

При нормальной оплодотворяющей способности спермы - нормоспермии - в 1 мл ее содержится не менее 60000000 сперматозоидов, не менее 70% активно подвижных форм и не более 20% патологических форм.

В зависимости от отклонений тех или иных показателей возникают патологические спермограммы, свидетельствующие о снижении оплодотворяющей способности спермы.

Исследования эякулята

Для обозначения патологических спермограмм применяется такая терминология:

  1. В зависимости от количества сперматозоидов в 1 мл эякулята различают олигозооспермию (уменьшено количество сперматозоидов), полизооспермию (увеличено количество сперматозоидов - более 250 000 000), азооспер- мию (полное отсутствие сперматозоидов при наличии клеток сперматогенеза), аспермию (отсутствие как сперматозоидов, так и клеток сперматогенеза).
  2. В зависимости от количества активно подвижных сперматозоидов проявляют астеноспермия (большой процент малоподвижных и неподвижных сперматозоидов), акиноспер- мию (отсутствие подвижных сперматозоидов), некроспермия (отсутствие живых сперматозоидов).
  3. В зависимости от количества патологических форм сперматозоидов различают анизооспермию (повышенный процент патологических форм сперматозоидов), микрозооспермию (преобладание сперматозоидов с малой головкой).

Оценка оплодотворяющей способности эякулята

При оценке эякулята выявляют следующие формы сперматозоидов:

  • преобладание сперматозоидов с большой головкой);
  • тератоспермия (преобладание сперматозоидов с искаженными двойными и аморфными головками).

В связи с тем, что изолированная изменение одной из этих свойств эякулята случается редко и чаще приходится наблюдать патологические изменения двух или всех трех свойств его, предлагаются комбинированные названия спермограмм: олигоастено- спермия, олиготератоспермия или даже олигоастенотера- тоспермия.

На оплодотворяющую способность спермы, кроме поражения сперматозоида, влияют изменения свойства плазмы эякулята. Поэтому при рассмотрении спермограммы надо учи, - ховуваты pH, количество фруктозы и фруктолиз, а также объем эякулята и «утомляемость» сперматозоидов. Кроме качественных показателей спермы, эти данные имеют значение и с точки зрения функциональной оценки придаточных половых желез и семявыносящих путей.

В зависимости от объема эякулята различают: олигоспер- мию - малое количество спермы; .полиспермию - большое количество спермы; асперматизм - отсутствие эякулята.

Для более глубокого изучения структуры сперматозоидов применяют электронную микроскопию. По мнению многих андрологов, проблема мужского бесплодия связана с интимными изменениями структуры сперматозоидов, которые, очевидно, являются ведущими в этой патологии.

Ряд авторов медицинских книг по аднрологии, отдавая должное методу электронной микроскопии, отмечают, что она не проявляет движения сперматозоидов и не помогает установить их биологическое состояние.

При исследовании морфолого-функциональных свойств сперматозоидов врачи предпочитают люминесцентную и аноптральную микроскопии, позволяющие изучать морфологию, физиологию и патологию живых клеток, а не выявление при обычной микроскопии.

Исследование эякулята в окрашенных микроскопических препаратах. Окрашенными препаратами рекомендуется пользоваться для определения морфологии сперматозоидов, клеток сперматогенеза и других включений, а также для дифференциации между живыми и мертвыми сперматозоидами.

Для определения морфологии сперматозоидов наибольшее распространен следующий метод (он удобен тем, что позволяет одновременно вести подсчет общего числа сперматозоидов и процента патологических форм):

В смеситель для лейкоцитов (автор применяет ерит- роцитарни меланжеры) набирают 0,5 мл эякулята и смешивают его из расчета 1: 20 с краской следующего состава: фуксина основного - 0,1 г, азур-эозина по Гимзе (азу- ра II 0 , 8 г \ эозина 3 г) 0,02 г, кислоты карболовой кристаллической лично - 0,2 г, глицерина чистого - 0,1 г, спирта ректификата 36® / о -2 мл, 1% раствора химически чистого хлорида натрия на дистиллированной воде- 100 мл.

После встряхивания меланжера заполняют счетную камеру Горяева обычным способом. Ядро головки сперматозоида окрашивается в синий цвет, другие части - в розовый. Определенно становится видно головки, шейки и хвоста сперматозоидов. Подсчет производят при увеличении в 400 раз (объектив 40, окуляр 10), в пяти больших квадратах. Подсчитывают только те сперматозоиды, головки которых лежат в середине квадрата. Число, полученное в пяти больших квадратах, и будет количеством (в миллионах) сперматозоидов в 1 мл эякулята.

При подсчете удобно пользоваться счетчиками для лейкоцитов крови, с помощью которых можно сразу отмечать нормальные и патологические сперматозоиды и автоматически суммировать их.

Исследования мужской спермы при бесплодии

Для подсчета патологических форм сперматозоидов можно воспользоваться методом окраски препарата- мазка (Wachtel, 1947). Мазок готовят обычным способом на обезжиренном предметном стекле. Окрашивают формалингенцианвиолетовою краской течение 20-ЗО секунд, после чего ее смывают водой. Краска, которая состоит из 3 частей 5% раствора формалина и 1 части насыщенного алкогольного раствора генцианвиолета, сохраняет свою пригодность в течение ряда лет. Для оценки процентного соотношения патологических форм сперматозоидов подсчитывают 500 клеток.

Поскольку в нативных препаратах нельзя отличить неподвижные живые сперматозоиды от мертвых, предложены методы окрашивания препаратов, основанные на том, что краску мертвые сперматозоиды воспринимают легче, чем живые.

На обезжиренное спиртом и эфиром предметное стекло наносят небольшую каплю спермы, добавляют туда 2 С капли 5% водного эозина, 1-2 секунды перемешивают рожком шлифовального стекла и делают мазок такой той- кий, чтобы он высыхал в течение минуты. Все это следует делать максимально быстро. Высохший мазок рассматривают под микроскопом. Сперматозоиды, которые были в момент окрашивания живыми (с поступательным движением), лишаю- ться не окрашен, а мертвые и ослабленные (с колебательным движением) окрашиваются в красный цвет. Подсчитывают подряд 500 сперматозоидов, отмечая число окрашенных, и затем вычисляют процент мертвых и живых.

Проще и точнее можно получить результат при люминесцентно-микроскопическом исследовании. После разрежения, но не позднее чем через час, небольшую каплю спермы наносят на предметное стекло. Рядом с ней-капли флуорохромов раствора акридинового оранжевого. Рожком тонкого предметного стекла обе капли тщательно смешивают, распределяют смесь тонким слоем и сразу же исследуют под микроскопом. Живые сперматозоиды люминесцируют зеленым светом, а мертвые - красным.

Раствор флуорохрома готовят так.

Берут 45 мл раствора Бекера (pH 7,8) и добавляют к нему 5 мл водного раствора акридинового оранжевого I: 2000 (состав раствора Бекера: глюкозы - 3 г, Na2HPO4-0,6 с, NaCl-0,2 с, KH2PO4- O1Ol г, дистиллированной воды - до 100 мл).

Подсчитывая сперматозоиды, следует отдельно обличуваты клетки сперматогенеза, то есть незрелые или юные, форми- сперматиды, пресперматиды, сперматоциды и спер- матогинии.

Молодые формы могут быть и при нормоспермии (около 2%), однако увеличение их свидетельствует о небла- гополуччя в канальцах яичка.

Если в эякуляте форуме сперматозоидов, наличие «юных» форм свидетельствует о нарушении спермиогенеза, а если и они отсутствуют, то следует думать о абтурационной форме аспермии.

Из дополнительных включений в эякуляте нужно обратить внимание на наличие лейкоцитов. Единичные лейкоциты бывают и в норме, но если в поле зрения более 10 лейкоцитов, то следует считать, что, очевидно, является воспалительный процесс в половых железах или семявыносящих путях. П. А. Кунин (1968) отмечает ухудшение подвижности сперматозоидов при увеличении лейкоцитов в эякуляте.

Число лейкоцитов подсчитывают одновременно с количеством сперматозоидов в камере Горяева. При нормоспермии в 1 мл содержится от 0 до 11000000 лейкоцитов.



Добавить комментарий

Сейчас комментируют

Надя
У меня после родов была такая боль. Просто роды тяжелые были. Ноющая боль в пояснице у женщин: симптомы и основные причины
Елена
Здравствуйте.Мне 35 лет.Последние 6 лет мучаюсь от странной болезни... Внутричерепное давление: причины и лечение
Татьяна
Соглашусь, что при экземе без мази просто не обойтись, особенно сухой Сухая экзема на ногах: что делать и как лечить?
Лилия
А вот интересно: если боль с позвоночником не связана, от обезболивающ Ноющая боль в пояснице у женщин: симптомы и основные причины